本文件規(guī)定了核酸靶序列定量方法的性能評估和質(zhì)量保證的通用要求。本文件適用于數(shù)字PCR(dPCR)或?qū)崟r定量PCR(qPCR)擴(kuò)增技術(shù)對DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)靶序列的定量測定。適用的靶序列核酸分子,包括雙鏈DNA(dsDNA),如基因組DNA(gDNA)和質(zhì)粒DNA;單鏈DNA(ssDNA),互補(bǔ)DNA(cDNA),單鏈RNA(ssRNA)包括核糖體RNA(rRNA)、信使RNA(mRNA);雙鏈RNA,包括長鏈和短鏈非編碼RNA[微小RNA(miRNA)和小干擾RNA(siRNA)等]。本文件適用于生物來源的核酸(如病毒、原核細(xì)胞和真核細(xì)胞)、無細(xì)胞生物液體樣本(如血漿或細(xì)胞基質(zhì));體外非生物來源的核酸[如寡核苷酸、合成的基因片段和體外轉(zhuǎn)錄(IVT)的RNA]中提取的核酸。本文件不適用于過短的DNA寡核苷酸(<50堿基)的定量。本文件包含:--分析設(shè)計(jì),包括定量策略(qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線法、dPCR分子計(jì)數(shù)法、qPCR相對定量法、dPCR比值定量法)和使用控制;--總核酸質(zhì)量濃度定量和核酸樣本質(zhì)量控制,包括核酸質(zhì)量的評估(純度和完整性);--PCR試驗(yàn)設(shè)計(jì)、優(yōu)化,生物信息學(xué)和體外特異性測試;--數(shù)據(jù)質(zhì)量控制和分析,包括驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)、閾值設(shè)置以及歸一化方法;--根據(jù)qPCR/dPCR具體要求的方法驗(yàn)證(精密度、線性、定量限、檢出限、正確度和穩(wěn)健性);--計(jì)量溯源性建立和測量不確定度評估的方法。本文件不對生物材料的抽樣或生物樣本的處理過程(如采集、保存、運(yùn)輸、儲存、處理和核酸提取)提出要求或驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。也不對特殊應(yīng)用(如可能出現(xiàn)特殊基質(zhì)問題的食品或者臨床應(yīng)用領(lǐng)域)提出要求和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。