近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)石油及兵產(chǎn)品的微生物降解研究常見報(bào)道，卻鮮見機(jī)油微生物降解方面的研究。本試驗(yàn)?zāi)康氖峭ㄟ^(guò)常規(guī)微生物馴化方法，以市售機(jī)油為唯一碳源，從油污土壤中分離篩選出機(jī)油高效降解菌株，并對(duì)其生長(zhǎng)條件及降解特性進(jìn)行研究，以期進(jìn)一步應(yīng)用于含油污水的治理。
    1 材料與方法
    1．1 土壤樣品
    某石油庫(kù)貯油罐附近的石油污染土壤，取樣3份，按含油量由多至少編為1＃，2＃，3＃。
    1．2 培養(yǎng)基
    本試驗(yàn)選取兩種無(wú)機(jī)基礎(chǔ)培養(yǎng)基，（用蒸餾水配制并高壓蒸氣滅菌），編號(hào)分別為1＃，2＃，組成如下：
    1?；A(chǔ)培養(yǎng)基：p（KH2PO4）＝0.5g/L，ρ（K2HPO4）＝0.5g/L，P（MgSO4·7H2O）=0.2g/L，ρ（NaCl）=0.2g/L，p（CaCl2）＝0.1g/L，ρ（NH4NO3）＝1.0g/L，MnSO4痕量，F(xiàn)eCl3痕量。
    2?；A(chǔ)培養(yǎng)基：p（NaNO3）=2.0g/L，ρ（KH2O4）＝0．2g/L，ρ（MgSO4.7H2O）＝0.2g/L，ρ（酵母浸膏）＝1.0g/L．
    含油培養(yǎng)基是向上述無(wú)機(jī)基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入適量機(jī)油。固體培養(yǎng)基中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0．2％的瓊脂。
    1．3 優(yōu)勢(shì)菌篩分試驗(yàn)
    1．3．1 選擇富集培養(yǎng)
    稱取土樣各10g，加入到500mL1＃含油培養(yǎng)基（含機(jī)油4mL）中，調(diào)pH值7.0，通氣恒溫30℃培養(yǎng)48h后，分別移取上述培養(yǎng)液5mL于45mL1＃，2＃含油培養(yǎng)基（含機(jī)油2mL）中，恒溫30℃振蕩培養(yǎng)。
    1.3.2 平板分離
    制作1＃，2＃固體含油培養(yǎng)基平板苦干，用接種環(huán)蘸取振蕩培養(yǎng)較好的菌液在相應(yīng)平板劃線，恒溫30℃培養(yǎng)48h后平板劃線分離，重復(fù)數(shù)次。選擇生長(zhǎng)狀況良好的菌株進(jìn)行平板擴(kuò)大培養(yǎng)。
    1．4 生長(zhǎng)條件正交試驗(yàn)
    在保證供氧和氮、磷營(yíng)養(yǎng)前提下，選擇溫度。油的質(zhì)量濃度（以mg/L計(jì)）和pH值作為本次實(shí)驗(yàn)的三個(gè)因素進(jìn)行三水平實(shí)驗(yàn)，方案見表1、表2。將平板培養(yǎng)48h的菌體刮下，5000r/min離心5min，分離得到濕菌體。向方案中每個(gè)樣品加入0.5g濕菌體，培養(yǎng)60h后測(cè)定樣品中油的質(zhì)量濃度。
    表1 ZL1菌株正交試驗(yàn)方案及試驗(yàn)結(jié)果

    表2  ZL2菌株正交試驗(yàn)方案及試驗(yàn)結(jié)果

    1.5 降解能力試驗(yàn)
    配制機(jī)油質(zhì)量濃度為270mg/L的含油培養(yǎng)基1L，投入小型間歇反應(yīng)器中，加入離心分離得到的濕菌體5g，通氣恒溫30℃培養(yǎng)，間隔12h取樣測(cè)定其含油量。
    1．6 測(cè)試方法
    用紫外介光光度法測(cè)定。
    2 結(jié)果分析
    2．1 優(yōu)勢(shì)菌篩分試驗(yàn)
    富集培養(yǎng)過(guò)程中，1＃土樣的培養(yǎng)液出現(xiàn)的泡沫較多，乳化現(xiàn)象明顯，菌液也較為粘稠，分離出較多的菌株，說(shuō)明土壤中的石油烴能刺激石油降解菌的生長(zhǎng)。經(jīng)過(guò)選擇富集培養(yǎng)、平板分離出4株以機(jī)油為唯一碳源的菌株，編號(hào)為ZL1，ZL2，ZL3，ZL4，性狀見表3。進(jìn)一步培養(yǎng)后篩選出降解性能較好的ZL1（1＃培養(yǎng)基）和ZL2（2＃培養(yǎng)基）進(jìn)行正交試驗(yàn)和連續(xù)培養(yǎng)試驗(yàn)。
    表3  4株機(jī)油降解菌形態(tài)特征

    2．2 生長(zhǎng)條件正交試驗(yàn)
    ZL1，ZL2菌株按設(shè)定的正交試驗(yàn)方案進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)定其剩余含油量，以降解油量作為考察指標(biāo)，計(jì)算結(jié)果見表2、表3。分析極差值R可以看出：ZL1菌的R溫度為128，ZL2菌的R溫度為73，均為最大極差值，說(shuō)明溫度是影響降解效果的主要因素。25℃ZL1菌降解機(jī)油能力較強(qiáng)；油質(zhì)量濃度越低降解效果越好；pH值為7時(shí)，降解效果最好，說(shuō)明ZL1菌適于在中性條件下生長(zhǎng)。30℃ZL2菌降解機(jī)油能力較強(qiáng)；機(jī)油的質(zhì)量濃度在368-767mg/L范圍內(nèi)對(duì)降解效果影響不大，以ρ（油）=574mg/L時(shí)降解效果最明顯，還應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大試驗(yàn)的油含量范圍以確定油含量對(duì)ZL2菌降解能力的影響；pH值在4－8范圍內(nèi)對(duì)降解效果的影響也不顯著，其中PH值為6時(shí)降解效果最好，說(shuō)明ZL2菌較適于在中性偏酸條件下生長(zhǎng)。
    2.3 降解能力試驗(yàn)
    向1L油質(zhì)量濃度為270mg/L培養(yǎng)液中投加5g濕菌體進(jìn)行間歇培養(yǎng)，考察ZLI，ZLZ菌的降解能力，結(jié)果見圖1。由含油量與培養(yǎng)時(shí)間關(guān)系曲線可以看出：ZL1，ZL2菌被加人含油培養(yǎng)基后很快適應(yīng)環(huán)境，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng)，含油量不斷下降。ZL1菌在30h左右去除率達(dá)到最大，后含油量下降緩慢，到60h左右曲線趨于平直；ZL2菌在20h左右去除率達(dá)最大，48h左右曲線趨于平直。曲線說(shuō)明ZL1，ZL2菌適應(yīng)能力較強(qiáng)，ZL1菌在0－60h內(nèi)生長(zhǎng)旺盛對(duì)機(jī)油的去除率可達(dá)67．9％，ZL2菌在0－48h內(nèi)生長(zhǎng)旺盛，對(duì)機(jī)油的去除率高達(dá)76.2％，試驗(yàn)后期降解曲線趨于平直，含油量基本不再變化，可能是由于機(jī)油中的一些重組分難于降解的原因。